Pitanja brtvljenja i kontaminacije u pločama s višewell staničnom kulturom

Učitavanje i rukovanje pločama s više jažica:

Ploča stanične kulture također slijedi princip stroge asepsis prilikom izvođenja stanica stanica. Sve operacije moraju biti standardizirane i znanstvene i neće uzrokovati dodatni utjecaj na rast stanica. Najčešći problem je kako osigurati ujednačenost stanica nakon dodavanja uzorka i minimizirati utjecaj promjene medija na stanje rasta stanica.

Pitajte:
Pokloni od 96 i 24 jažica ili Petri jela su vrlo labavi, što je prikladno za ventilaciju, ali hoće li se i bakterije, plijesan i drugi zagađivači također uvući?

odgovor:
Poklopac je vrlo labav, koji pripada polu-otvorenoj kulturi, a svrha toga je prozračivanje (u stvari, to je učiniti CO2 izvan kultura u potpunosti razmijeniti se s jelom za kulturu i održavati pH vrijednost kulture srednji).
Sve ima prednosti i nedostatke, što naravno povećava mogućnost zagađenja. Osim toga, to uzrokuje isparavanje tekućine u posudi, što je zapaženo po preciznom doziranju droga. Stoga su potrebne sljedeće dvije mjere: a. Zrak u inkubatoru mora biti čist (redovito ultraljubičasto svjetlo, pročišćavanje alkohola, a inkubator treba otvoriti i zatvoriti što je manje moguće) b. Vlažnost inkubatora uvijek se mora držati na 100% (sudoper sa sterilnom destiliranom vodom postavljenom u inkubatoru).
Baš kao i Petri jelo, to je i posuda s poklopcem naopako, i neće biti zagađena. Uglavnom zbog negativnog tlaka protoka zraka generiranog rubom poklopca "L", postoje mikroorganizmi pričvršćeni na prašinu, a prašina koju nosi protok zraka ne može proći kroz rub poklopca koji stvara negativni tlak. Učinak ventilacije je samo kroz difuziju zraka, a neće se stvoriti protok zraka, tako da će samo disati, a ne prodirati u bakterije.

Pitajte:
Koristeći ploču s 24 jažica, postoje operacije u nekim od bunara (u ultra-čistoj klupi), a postoje stanice koje se uzgajaju u drugim bušotinama. Zabrinut sam da će to uzrokovati onečišćenje. Ne znam na što da obratim pažnju?

odgovor:
Ako je operacija standardizirana u ultra-čistoj klupi, trebalo bi biti u redu. Mislim da možete u potpunosti iskoristiti poklopac ploče za kulturu, pokušati izložiti samo rupe za upravljanje, a ostale rupe prekrivati ​​pokrivačima.
Prije upotrebe razmotrite sveobuhvatno i u potpunosti iskoristite sve rupe; Ako trebate koristiti samo nekoliko rupa, možete koristiti samo jednu stranu, a ostatak prekrijte poklopcem. Prvo sam navikao koristiti desnu rupu (prikladno je dodavati uzorke u desnu ruku).

Prilikom rada koristite nekoliko staklenih tobogana za podizanje jedne strane ploče, ne otvarajte poklopac u potpunosti, uglavnom nema problema.
Neravnomjerna distribucija stanica i rješenja

Pitajte:
Stanice se inokuliraju na kulturnoj ploči, a stanice se uvijek okupljaju u perifernom dijelu, kako se nositi s njom?

odgovor:
Mogu li pitati kako se vaše stanice miješaju? Je li to pipkanje ili tresenje kulturne ploče? Ako je ovo posljednje, a ako se uzdrma u krugu, vrlo je vjerojatno da će stanice biti bačene na periferni dio zbog centrifugalne sile, što je rezultiralo manje stanica u sredini. Više od četiri tjedna!
Evo dobrog načina: Prije nego što uzgajate sjemensku ploču, stavite ploču za kulturu u inkubator na nekoliko sati zasićenja, a zatim je izvadite. Sila bi trebala biti lagana prilikom sadnje stanica. Dodavanje polako omogućava da stanični ovjes teče u bunare ploče, a uzgojene stanice u osnovi rastu ravnomjerno. Ne zaboravite da se nikada ne tresete s tresanjem ili će se vaše stanice zbiljke zajedno kao što ste rekli.
Što je manji promjer rupe na ploči s kulturom, to je očigledniji ovaj fenomen. Ovaj je fenomen neizbježan za ploče od 24 i 96 jažica, jer se tekućina pridržava zida tako da kulturna otopina u bušotini ne tvori razinu tekućine, ali periferija je visoka, baš kao i konkavno ogledalo. Međutim, kada se koristi ove dvije vrste ploča za otvor, nije moguće dodati dovoljnu količinu rješenja kulture zbog potrebe za dodatnom intervencijom, tako da će se stanice pojaviti "prikupljanje ruba" zajedno s kulturološkom otopinom. Ovisi o tome koje pokazatelje trebate promatrati. Ako se radi o MTT -u, imunohistokemija će utjecati na rezultate uslijed sloja stanica.
Prilikom probavljanja stanica, obratite pažnju na ravnomjerno pipeti kako biste izbjegli nakupine stanica, a količina rješenja kulture u bunaru trebala bi biti dovoljna. Općenito, dodajte dovoljno rješenja kulture pri inokuliranju i promijenite otopinu jednom prilikom dodavanja intervencije. Količina otopine kulture dodana u intervencijsku otopinu jednaka je količini otopine kulture u vrijeme inokulacije, u ovom će se slučaju poboljšati pojava "rubnog seta", tako da biste ga mogli pokušati.

Pitajte:
Ono što sam učinio bio je eksperiment formacije plaka. Najbolje je širiti stanice u jednoličnom sloju. Većina rupa je u redu kada se virus inokulira, a neke od njih nisu ujednačeni. Postoje velike razlike u staničnoj skupini. Želio bih vas pitati koju metodu koristite prilikom dodavanja ćelija?

odgovor:
Kritično je za pipetu stanice u jednoćelijsku ovjes nakon probave! Provjerite je li broj ćelija u svakoj jažici dosljedan pri cijepanju ploče!
Naravno, postoje i faktori obrade. Paralelizam između bušotina je također vrlo važan. Na primjer, prilikom dodavanja lijeka pomiješajte lijek nakon razrjeđivanja kako biste osigurali da je koncentracija svake jažice dosljedna!
Nadalje, prilikom dodavanja stanica i lijekova, testnu skupinu i kontrolnu skupinu trebaju se dodati zauzvrat kako bi se izbjegla razlika u gustoći stanica i koncentraciji lijeka uzrokovana redoslijedom dodavanja uzoraka!

Pitajte:
Puhanje je već ujednačeno, ali daska, 6 rupa i 24 rupe uvijek su pomalo neujednačene, a malo koncentrirane u sredini. Nadalje, očito je da se brojanje obavlja, a nakon dana ili dva gustoća svake rupe je različita, što će utjecati na otkrivanje. Postoji li dobar način?

odgovor:
Ako koristite pasteur pipetu, ne usisajte previše svaki put, jer će stanice u pipeti automatski potonuti, često je broj ćelija u prvih nekoliko rupa velik, a stanični ovjes je često ujednačen, a tekućina će Slijedite rutu S-oblika.
Ako koristite pipetu, vrhove treba obraditi i ukloniti kako ne bi oštetili stanice, tako da svaki put kada se tekućina uzima odgovara bušotini. Točnije je dodati rupu jedan na jedan s vrhom. Ali također obratite pažnju na miješanje suspenzije.

Za postavljanje paralelne skupine, n mora biti dovoljno velik (možete je izračunati).

Ne tresete se nakon pljeskanja, jer će se trese uzrokovati da se stanice objedine prema sredini. Najbolje je jednom da.

Ploča porozne stanične kulture Yongyue Medical uvijek je kontrolu kvalitete smatrala životom poduzeća i slijedila je kontinuirano poboljšanje konkurentnosti poduzeća. Tvrtka se uvijek pridržava poduzetničkog duha pokoravanja zakona i propisa, stroga sa samodisciplinom, popustljivim i usuđujući se preuzeti odgovornost kao standard u radu, održavanje i proširivanje tržišta izvrsnom kvalitetom i izvrsnom uslugom i ispunjavanjem navedene potrebe kupaca u najvećoj mjeri. . Win-win s kupcima je naš razvojni cilj. Yongyue Medical! Vaš pouzdani partner. Spremni smo iskreno surađivati ​​s vama kako bismo stvorili bolju budućnost.